T7 DNA聚合酶

英文名稱(chēng) ： T7 DNA Polymerase

分子量 ： 由2個(gè)亞基組成，804kDa多肽（T7噬菌體基因5表達(dá)產(chǎn)物）和12kDa硫氧還蛋白（大腸桿菌trxA基因表達(dá)產(chǎn)物）

級(jí) 別 ： BR

來(lái) 源 ： 兩個(gè)大腸桿菌菌株，一個(gè)菌株含有T7噬菌體克隆基因5，另一個(gè)菌株含有大腸桿菌克隆基因trxA

保 存 ： -20°C

濃 度 ： 10u/ul

活力定義 ： 在37°C條件下，30分鐘內(nèi)能使10 nmol 的脫氧核糖核苷酸摻入多聚核苷酸片段（吸附在DE-81上）所需的酶量

活性分析混合物 ： 40mM Tris-HCL(PH7.5), 1mM DTT, 10mM MgCL2, 0.1mg/ml BSA, 0.033mM各種dNTP,0.4MBq/ML(3H)-dTTP和0.5mM堿性變性的牛胸腺DNA

保存緩沖液組分 ： 20mM 磷酸鉀(PH7.4), 0.1mM EDTA, 1mM DTT和50%(v/v)甘油

10×反應(yīng)緩沖液 ： 400mM Tris-HCL(PH7.5，25℃), 100mM MgCL2, 10mM DTT

抑制劑 ： 金屬螯合劑，修飾試劑（無(wú)水醋酸和N-乙基順丁烯二酰亞胺可使3'→5' 外切核酸酶失活，但不影響聚合酶活性

失 活 ： 75℃加熱10分鐘

質(zhì)量控制 ： 測(cè)試表明無(wú)內(nèi)切脫氧核糖核酸酶污染

使用注意 ： 37℃分析時(shí)需要短時(shí)間孵育

性 狀 ： 懸浮液，重組酶。T7 DNA聚合酶是一種模板依賴(lài)型DNA聚合酶，催化5'→3'方向的DNA合成。該DNA聚合酶具有高持續(xù)合成能力，可持續(xù)合成長(zhǎng)片段DNA。該酶對(duì)單鏈和雙鏈DNA具有3'→5'外切核酸酶活性

用 途 ： 生化研究。除去殘留的基因組DNA，純化共價(jià)閉環(huán)的DNA分子；長(zhǎng)片段引物延伸反應(yīng)；DNA 3'-末端標(biāo)記；定點(diǎn)突變位點(diǎn)的鏈延伸反應(yīng)；DNA 5'-突出點(diǎn)位補(bǔ)平；第二鏈cDNA合成；原位檢測(cè)凋亡相關(guān)DNApian段